APPLICATION OF DIFFERENT FLUORESCENT DYES FOR THE CELL NUCLEUS STAINING IN A FIXED BIOLIDGICAL MATERIAL

Abstract

Fluorescent nuclear dyes are widely applicable to cell nucleus staining in various tissues. Application of dye for concrete research is serious problem and it is necessary to consider a number of parameters, such as extent of chromatin condensation in studied cells, method of tissue fixation etc. Features of fluorescent staining were studied for cells of various tissues fixed in zinc-ethanol-formaldehyde, 10% neutral formalin, Bouin’s fluid. The optimal staining protocol was developed for each fluorescent dye. Each protocol considers some features of used dye and method of material processing. The possibility of effective combination of nuclear fluorescent staining with immunofluorescent methods was also shown.

Keywords

nuclear staining dyes / fluorochromes / fluorescent dyes / fluorescence

References

[1] Коржевский Д.Э., Кирик О.В., Сухорукова Е.Г., Гиляров А.В., Соловьев К.В., Грудинина Н.А. Изучение пространственной организации астроцитов головного мозга при помощи конфокальной лазерной микроскопии // Морфология. - 2009. - Т. 135, № 3. - С. 76-79.

[2] Лёвшин В.Л. Фотолюминесценция жидких и твердых веществ. - М. - Л.: Гостехиздат, 1951. - 456 с.

[3] Вежеева О.А., Сергеева Т.Н., Сергеев В.Г. Ингибирование нейровоспаления редуцирует дегенерацию дофаминергических нейронов черной субстанции мозга, индуцированную гиперэксперессией в них рекомбинантного гена альфа-синуклеина человека // Медицинский академический журнал. - 2013. - Т. 13, № 3. - С. 71-77.

[4] Коржевский Д.Э., Кирик О.В., Карпенко М.Н. Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохимии (руководство) / под ред. Д.Э. Коржевского. - СПб.: СпецЛит, 2012. - 116 с.

[5] Коржевский Д.Э., Кирик О.В. Специальные методы окраски, используемые для изучения структур клеточного ядра // Морфологическая диагностика. Подготовка материала для гистологического исследования и электронной микроскопии (руководство) / под ред. Д.Э. Коржевского. - СПб.: СпецЛит, 2012. - С. 59-65.

[6] Коржевский Д.Э. Нейрогенез и нейральные стволовые клетки // Медицинский академический журнал. - 2010. - Т. 10, № 4. - С. 175-182.

[7] Коржевский Д.Э., Гиляров А.В. Основы гистологической техники. - СПб.: СпецЛит, 2010. - 96 с.

[8] Коржевский Д.Э., Григорьев И.П., Новикова А. Д., Ковальчук В.А., Кирик О.В. Холинергические структуры поясной коры головного мозга крысы // Медицинский академический журнал. - 2013. - Т. 13, № 4. - С. 49-53.

[9] Suzuki T., Fujikura K., Higashiyama T., Takata K. DNA staining for fluorescence and laser confocal microscopy // J. Histochem. Cytochem. - 1997. - Vol. 45, № 1. - P. 49-53.

[10] Takata K., Hirano H. Use of fluorescein-phalloidin and DAPI as a counterstain for immunofluorescence microscopic studies with semithin frozen sections // Acta Histochem. Cytochem. - 1990. - Vol. 23, № 5. - P. 679-683.

[11] Сибирцев В.С. Флуоресцентные ДНК-зонды: исследование механизмов изменения спектральных свойств и особенностей практического применения // Биохимия. - 2007. - Т. 72, вып. 8. - С. 1090-1106.

[12] Matsuzaki T., Suzuki T., Fujikura K., Takata K. Nuclear staining for laser confocal microscopy // Acta Histochem. Cytochem. - 1997. - Vol. 30. - P. 309-314.

[13] Suzuki T., Matsuzaki T., Takata K. Fluorescence counter-staining of cell nuclear DNA for Multi-Color Laser Confocal Microscopy // Acta histochemica et cytochemica. - 1998. - Vol. 31, № 4. - P. 297-301.

[14] Никитин С.М., Гроховский С.Л., Жузе А.Л., Михайлов М.В., Заседателев А.С., Гурский Г.В., Готтих Б.П. Лиганды, обладающие сродством к определенным или последовательностям оснований ДНК // Биоорганическая химия. - 1981. - Т. 7, № 4. - С. 542-551.

[15] Битехтина М.А., Векшин Н.Л. 7-Аминоактиномицин как флуоресцентный зонд на расплетание и денатурацию ДНК // Биоорганическая химия. - 2008. - Т. 34, № 6. - С. 781-785.

[16] Greenlee J.E., Keeney P.M. Immunofluorescent labelling of K-papovavirus antigens in glycol methacrylate embedded material: a method for studying infected cell populations by fluorescence microscopy and histological staining of adjacent sections // Stain Technol. - 1982. - Vol. 57, № 4. - P. 197-205.

[17] Коржевский Д.Э., Сухорукова Е.Г., Гилерович Е.Г., Петрова Е.С. Преимущества и недостатки цинк-этанол-формальдегида как фиксатора для иммуноцитохимических исследований конфокальной лазерной микроскопии // Морфология. - 2013. - Т. 143, № 2. - С. 81-85.

RIGHTS & PERMISSIONS

Syrczova M.A., Kolos E.A., Snegova V.A., Guselnicova V.V.