THREE-DIMENSIONAL VISUALIZATION OF THE BRAIN EPENDYMA AND TANYCYTES

Abstract

The aim of this investigation was to develop an integrated approach to spatial reconstruction of the cells lining the ventricles of the brain using confocal laser microscopy and immunocytochemical reaction to vimentin. The work was performed on paraffin sections of rat brain of different thickness (5 and 10 μm). To visualize the immunocytochemical reaction the fluorescent dyes in the visible range were selected: SYTOX Green selectively staining the nucleus and indocarbocyanin (Cy-3) conjugated with streptavidin. As a result of testing of various processing conditions, the protocol which allows to receive an intensive staining of the structures was developed. The set of fluorochromes proposed in confocal laser microscopy allows to separate easily the channels, to study the structures independently, if needed, and does not require the use of an expensive ultraviolet laser.

Keywords

brain / ependyma / tanycytes / vimentin / confocal laser microscopy

References

[1] Кирик О. В. и Коржевский Д. Э. Виментин в клетках эпендимы и субвентрикулярной пролиферативной зоны конечного мозга крысы. Клеточные технологии в биологии и медицине, 2012, вып. 4, с. 210–214.

[2] Коржевский Д. Э., Кирик О. В., Сухорукова Е. Г. и др. Изучение пространственной организации астроцитов головного мозга при помощи конфокальной лазерной микроскопии. Морфология, 2009, т. 135, вып. 3, с. 76–79.

[3] Коржевский Д. Э., Ленцман М. В., Кирик О. В. и Отеллин В. А. Виментин-иммунопозитвные клетки конечного мозга крысы после экспериментального ишемического инсульта. Морфология, 2007, т. 132, вып. 5, с. 23–27.

[4] Коржевский Д. Э., Сухорукова Е. Г., Гилерович Е. Г. и др. Преимущества и недостатки цинк-этанол-формальдегида как фиксатора для иммуноцитохимических исследований и конфокальной лазерной микроскопии. Морфология, 2013, т. 143, вып. 2, с. 81–85.

[5] Петрова Е. С. Виментин и глиальный фибриллярный кислый белок в клетках эктопических нейротрансплантатов неокортекса крыс. Морфология, 2011, т. 139, вып. 2, с. 22–26.

[6] Bruni J. E. Ependimal development, proliferation and functions. A review. Microsc. Res. Tech., 1998, v. 41, p. 2–13.

[7] Navarro A., Tolivia J. and Alvarez-Uria M. Ultrastructural study of a special type of ependymal cell at paraventricular level of the golden hamster third ventricle. Histol. Histopathol., 1995, v. 10, p. 861–868.

RIGHTS & PERMISSIONS

Eco-Vector