Antimicrobial properties of endophytic actinomycetes isolated from Combretum latifolium Blume, a medicinal shrub from Western Ghats of India

Abstract

Endophytic actinomycetes were isolated from Combretum latifolium Blume (Combretaceae), Western Ghats of Southern India and identified by its characteristic culture morphology and molecular analysis of 16S rRNA gene sequences. In this survey of endophytic actinomycetes, a total of 117 isolates representing 9 different genera of endophytic actinomycetes were obtained using four different isolation media and several of them seemed to be novel taxa. Streptomyces genera (35%) was the most frequently isolated strains, followed by Nocordiopsis (17%) and Micromonospora (13%). ISP-4 medium recovered more isolates (47%) when compared to rest of the media used. Preliminary antibacterial activity of the isolates was carried out by confrontation test. Ethyl acetate fraction of selected isolates in disc diffusion assay exhibited broad spectrum antimicrobial activity against test human pathogens. All Streptomyces spp. strains displayed significant antimicrobial activity against test pathogens. Strain CLA-66 and CLA-68 which are Nocordipsis spp. inhibited both bacterial and fungal pathogens where as other isolates inhibited atleast three test human pathogens in disc diffusion assay. Antimicrobial screening of endophytic actinomycetes from this host may represent a unique potential niche for antimicrobial compounds of industrial and pharmaceutical applications. This work is the first comprehensive report on incidence of potential endophytic actinomycetes inhabiting C. latifolium Blume.

Keywords

endophytic actinomycetes / Combretum latifolium Blume / Streptomyces / antimicrobial activity

References

[1] Akshatha V J, Nalini M S, D’Souza C, Prakash H S (2014). Streptomycete endophytes from anti-diabetic medicinal plants of the Western Ghats inhibit alpha-amylase and promote glucose uptake. Lett Appl Microbiol, 58(5): 433–439

[2] Anibou M, Zyadi A, Chait A, Benharref A, Ouhdouch Y (2008). Actinomycetes from Moroccan habitats: isolation and screening for cytotoxic activities. World J Microbiol Biotechnol, 24(10): 2019–2025

[3] Baltz R H (2010). Streptomyces and Saccharopolyspora hosts for heterologous expression of secondary metabolite gene clusters. J Ind Microbiol Biotechnol, 37(8): 759–772

[4] Barakate M, Ouhdouch Y, Oufdou K, Beaulieu C (2002). Characterization of rhizospheric soil Streptomycetes from Moroccan habitats and their antimicrobial activities. World J Microbiol Biotechnol, 18(1): 49–54

[5] Bascom-Slack C A, Ma C, Moore E, Babbs B, Fenn K, Greene J S, Hann B D, Keehner J, Kelley-Swift E G, Kembaiyan V, Lee S J, Li P, Light D Y, Lin E H, Schorn M A, Vekhter D, Boulanger L A, Hess W M, Vargas P N, Strobel G A, Strobel S A (2009). Multiple, novel biologically active endophytic actinomycetes isolated from upper Amazonian rainforests. Microb Ecol, 58(2): 374–383

[6] Bensultana A, Ouhdouch Y, Hassani L, Mezrioui N, Rafouk L (2010). Isolation and characterization of wastewater sand filter actinomycetes. World J Microbiol Biotechnol, 26(3): 481–487

[7] Bérdy J (2005). Bioactive microbial metabolites. J Antibiot (Tokyo), 58(1): 1–26

[8] Debnath B, Debnath A, Shilsharma A, Paul C (2014). Ethnomedicinal knowledge of Mog and Reang communities of south district of Tripura, India. Indian J Adv Plant Res, 1(5): 49–54

[9] Demain A L (1995). Why do microorganisms produce antimicrobials? In: Hunter PA, Darby GK, Russell NJ (ed.): Fifty years of antimicrobials: past, prospective and future trends- Symposium 53. Society of General Microbiology, Cambridge University Press: 205–228.

[10] Dharmaraj S (2011). Antagonistic potential of marine actinobacteria against fish and shellfish pathogens. Turk J Biol, 35: 303–311

[11] El-Tarabily K A, Soliman M H, Nassar A H, Al-Hassani H A, Sivasithamparam K, McKenna F, Hardy G E (2000). Biological control of Sclerotinia minorusing a chitinolytic bacterium and actinomycetes. Plant Pathol, 49(5): 573–583

[12] Fiedler H P, Bruntner C, Riedlinger J, Bull A T, Knutsen G, Goodfellow M, Jones A, Maldonado L, Pathom-aree W, Beil W, Schneider K, Keller S, Sussmuth R D (2008). Proximicin A, B and C, novel aminofuran antibiotic and anticancer compounds isolated from marine strains of the actinomycete Verrucosispora. J Antibiot (Tokyo), 61(3): 158–163

[13] Fischbach M A, Walsh C T (2009). Antibiotics for emerging pathogens. Science, 325(5944): 1089–1093

[14] Fourati-Ben Fguira L, Fotso S, Ben Ameur-Mehdi R, Mellouli L, Laatsch H (2005). Purification and structure elucidation of antifungal and antibacterial activities of newly isolated Streptomyces sp. strain US80. Res Microbiol, 156(3): 341–347

[15] Gangwar M, Dogra S, Gupta U P, Kharwar R N (2014). Diversity and biopotential of endophytic actinomycetes from three medicinal plants in India. Afr J Microbiol Res, 8(2): 184–191

[16] Highley T L, Ricard J (1988). Antagonism of Trichoderma spp. and Gliocladium virens against wood decay fungi. Mater Organismen, 23: 157–169

[17] Hou B C, Wang E T, Li Y, Jia R Z, Chen W F, Man C X, Sui X H, Chen W X (2009). Rhizobial resource associated with epidemic legumes in Tibet. Microb Ecol, 57(1): 69–81

[18] Jensen P R, Dwight R, Fenical W (1991). Distribution of actinomycetes in near-shore tropical marine sediments. Appl Environ Microbiol, 57(4): 1102–1108

[19] Ji H F, Li X J, Zhang H Y (2009). Natural products and drug discovery. Can thousands of years of ancient medical knowledge lead us to new and powerful drug combinations in the fight against cancer and dementia? EMBO Rep, 10(3): 194–200

[20] Johannes H, Gabriele B, Barbara S (2006). Isolation procedures for endophytic microorganisms. Berlin, Springer. 299–305

[21a] Kieser T, Bibb M J, Buttner M J, Chater K F, Hopwood D A (2000). Practical Streptomyces Genetics. Norwich, UK: The John Innes Foundation

[21] Lam K S (2006). Discovery of novel metabolites from marine actinomycetes. Curr Opin Microbiol, 9(3): 245–251

[22] Li J, Zhao G Z, Chen H H, Wang H B, Qin S, Zhu W Y, Xu L H, Jiang C L, Li W J (2008). Antitumour and antimicrobial activities of endophytic streptomycetes from pharmaceutical plants in rainforest. Lett Appl Microbiol, 47(6): 574–580

[23] Li J, Zhao G Z, Huang H Y, Qin S, Zhu W Y, Zhao L X, Xu L H, Zhang S, Li W J, Strobel G, Strobel G (2012). Isolation and characterization of culturable endophytic actinobacteria associated with Artemisia annua L. Antonie van Leeuwenhoek, 101(3): 515–527

[24] Liu H, Xiao L, Wei J, Schmitz J C, Liu M, Wang C, Cheng L, Wu N, Chen L, Zhang Y, Lin X (2013). Identification of Streptomyces sp. nov. WH26 producing cytotoxic compounds isolated from marine solar saltern in China. World J Microbiol Biotechnol, 29(7): 1271–1278

[25] Loqman S, Barka E A, Clement C, Ouhdouch Y (2009). Antagonistic actinomycetes from Moroccan soil to control the grapevine gray mold. World J Microbiol Biotechnol, 25(1): 81–91

[26] Miyadoh S, Hamada M, Hotta K, Kudo T, Seino A, Vobis G (1997). Atlas of Actinomycetes, The Society for Actinomycetes, Japan. Asakura Publishing Co. Ltd. Tokyo, Japan

[27] Nagpure A, Choudhary B, Kumar S, Gupta R K (2014). Isolation and characterization of chitinolytic Streptomyces sp. MT7 and its antagonism towards wood-rotting fungi. Ann Microbiol, 64(2): 531–541

[28] Nolan R D, Cross T (1988). Isolation and screening of actinomycetes. In: Goodfellow M, Williams ST, Mordarski MM (ed): Actinomycetes in biotechnology. Academic Press, ISBN 0–12–289673–4, London.

[29] Qin S, Li J, Chen H H, Zhao G Z, Zhu W Y, Jiang C L, Xu L H, Li W J (2009). Isolation, diversity, and antimicrobial activity of rare actinobacteria from medicinal plants of tropical rain forests in Xishuangbanna, China. Appl Environ Microbiol, 75(19): 6176–6186

[30] Qin S, Xing K, Jiang J H, Xu L H, Li W J (2011). Biodiversity, bioactive natural products and biotechnological potential of plant-associated endophytic actinobacteria. Appl Microbiol Biotechnol, 89(3): 457–473

[31] Ramesh S, Mathivanan N (2009). Screening of marine actinomycetes isolated from the Bay of Bengal, India for antimicrobial activity and industrial enzymes. World J Microbiol Biotechnol, 25(12): 2103–2111

[31a] Rao H C Y, Satish S (2015). Genomic and chromatographic approach for the discovery of polyketide antimicrobial metabolites from an endophytic Phomopsis liquidambaris CBR-18. Front Life Sci, 8: 200–207

[31b] Rao H C Y, Santosh P, Rakshith D, Satish S (2015). Molecular characterization of an endophytic Phomopsis liquidambaris CBR-15 from Cryptolepis buchanani Roem. and impact of culture media on biosynthesis of antimicrobial metabolites. 3Biotech, 5: 165–173

[32] Schulz D, Nachtigall J, Riedlinger J, Schneider K, Poralla K, Imhoff J F, Beil W, Nicholson G, Fiedler H P, Süssmuth R D (2009). Piceamycin and its N-acetylcysteine adduct is produced by Streptomyces sp. GB 4-2. J Antibiot (Tokyo), 62(9): 513–518

[33] Sheil D (1999). Tropical forest diversity, environmental change and species augmentation: after the intermediate disturbance hypothesis. J Veg Sci, 10(6): 851–860

[34] Shirling E B, Gottlieb D (1966). Methods for characterization of Streptomyces species. Int J Syst Bacteriol, 16(3): 313–340

[35] Shrisha D L, Raveesha K A, Nagabhushan (2011). Bioprospecting of selected medicinal plants for antibacterial activity against some pathogenic bacteria. J Medicinal Plants Res, 5(17): 4087–4093

[36] Shutsrirung A, Chromkaew Y, Aree W P, Choonluchanon S (2013). Diversity of endophytic actinomycetes in mandarin grown in northern Thailand, their phytohormone production potential and plant growth promoting activity. Soil Sci Plant Nutr, 59(3): 322–330

[37] Singh J M, Padmavathy S (2015). Nocardiopsis sp. 5 Endophytic to Tulsi Leaves- Isolation and Antimicrobial Activity. Br Microbiol Res J, 5(3): 194–202

[38] Strobel G, Daisy B, Castillo U, Harper J (2004). Natural products from endophytic microorganisms. J Nat Prod, 67(2): 257–268

[39] Sujatha P, Bapi Raju K V V S N, Ramana T (2005). Studies on a new marine streptomycete BT-408 producing polyketide antibiotic SBR-22 effective against methicillin resistant Staphylococcus aureus. Microbiol Res, 160(2): 119–126

[40] Suthari S, Sreeramalu N, Omkar K, Raju V S (2014). The climbing plants of northern telangana in india and their ethnomedicinal and economic uses. Indian J Plant Sci, 2319–3824

[41] Takahashi Y, Omura S (2003). Isolation of new actinomycete strains for the screening of new bioactive compounds. J Gen Appl Microbiol, 49(3): 141–154

[42] Verma S K, Gond S K, Mishra A, Sharma V K, Kumar J, Singh D K, Kumar A, Goutam J, Kharwar R N (2013). Impact of environmental variables on the isolation, diversity and antibacterial activity of endophytic fungal communities from Madhuca indica Gmel. at different locations in India. Ann Microbiol

[43] Verma V C, Gond S K, Kumar A, Mishra A, Kharwar R N, Gange A C (2009). Endophytic actinomycetes from Azadirachta indica A. Juss.: isolation, diversity, and anti-microbial activity. Microb Ecol, 57(4): 749–756

[44] Yan X C (1992). Isolation and identification of actinomycete. Science Beijing, pp 45–68

[45] You J L, Cao L X, Liu G F, Zhou S N, Tan H M, Lin Y C (2005). Isolation and characterization of actinomycetes antagonistic to pathogenic Vibrio spp. from near shore marine sediments. World J Microbiol Biotechnol, 21(5): 679–682

[46] Yu H, Zhang L, Li L, Zheng C, Guo L, Li W, Sun P, Qin L (2010). Recent developments and future prospects of antimicrobial metabolites produced by endophytes. Microbiol Res, 165(6): 437–449

Acknowledgment

Authors are thankful to University Grants Commission (UGC) and University of Mysore, India for providing Ph.D. fellowship to the first author. Authors also thank Institution of Excellence, University of Mysore for providing instrumentation facilities.

RIGHTS & PERMISSIONS

2014 Higher Education Press and Springer-Verlag Berlin Heidelberg