Role of apolipoproteins, ABCA1 and LCAT in the biogenesis of normal and aberrant high density lipoproteins

Abstract

In this review, we focus on the pathway of biogenesis of HDL, the essential role of apoA-I, ATP binding cassette transporter A1 (ABCA1), and lecithin: cholesterol acyltransferase (LCAT) in the formation of plasma HDL; the generation of aberrant forms of HDL containing mutant apoA-I forms and the role of apoA-IV and apoE in the formation of distinct HDL subpopulations. The biogenesis of HDL requires functional interactions of the ABCA1 with apoA-I (and to a lesser extent with apoE and apoA-IV) and subsequent interactions of the nascent HDL species thus formed with LCAT. Mutations in apoA-I, ABCA1 and LCAT either prevent or impair the formation of HDL and may also affect the functionality of the HDL species formed. Emphasis is placed on three categories of apoA-I mutations. The first category describes a unique bio-engineered apoA-I mutation that disrupts interactions between apoA-I and ABCA1 and generates aberrant preβ HDL subpopulations that cannot be converted efficiently to α subpopulations by LCAT. The second category describes natural and bio-engineered apoA-I mutations that generate preβ and small size α4 HDL subpopulations, and are associated with low plasma HDL levels. These phenotypes can be corrected by excess LCAT. The third category describes bio-engineered apoA-I mutations that induce hypertriglyceridemia that can be corrected by excess lipoprotein lipase and also have defective maturation of HDL. The HDL phenotypes described here may serve in the future for diagnosis, prognoses and potential treatment of abnormalities that affect the biogenesis and functionality of HDL.

Keywords

HDL biogenesis / HDL phenotypes / apolipoprotein A-I mutations / apolipoprotein E / apolipoprotein A-IV / ATP- binding cassette transporter A1 (ABCA1)

References

[1] Zannis VI, Cole  FS, Jackson CL , Distribution of apolipoprotein A-I, C-II, C-III, and E mRNA in fetal human tissues. Time-dependent induction of apolipoprotein E mRNA by cultures of human monocyte-macrophages[J]. Biochemistry, 1985, 24(16): 4450–4455.

[2] Zannis VI, Chroni  A, Krieger M . Role of apoA-I, ABCA1, LCAT, and SR-BI in the biogenesis of HDL[J]. J Mol Med (Berl), 2006, 84(4): 276–294.

[3] Fotakis P, Kateifides  AK, Gkolfinopoulou C , Role of the hydrophobic and charged residues in the 218-226 region of apoA-I in the biogenesis of HDL[J]. J Lipid Res, 2013, 54(12): 3281–3292.

[4] Daniil G, Phedonos  AA, Holleboom AG , Characterization of antioxidant/anti-inflammatory properties and apoA-I-containing subpopulations of HDL from family subjects with monogenic low HDL disorders[J]. Clin Chim Acta, 2011, 412(13-14): 1213–1220.

[5] Sundaram M, Yao  Z. Intrahepatic role of exchangeable apolipoproteins in lipoprotein assembly and secretion[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2012, 32(5): 1073–1078.

[6] Kiss RS. McManus   DC, Franklin  V , The lipidation by hepatocytes of human apolipoprotein A-I occurs by both ABCA1-dependent and-independent pathways[J]. J Biol Chem, 2003, 278(12): 10119–10127

[7] Chisholm JW, Burleson  ER, Shelness GS , ApoA-I secretion from HepG2 cells: evidence for the secretion of both lipid-poor apoA-I and intracellularly assembled nascent HDL[J]. J Lipid Res, 2002, 43(1): 36–44.

[8] Maric J, Kiss  RS, Franklin V , Intracellular lipidation of newly synthesized apolipoprotein A-I in primary murine hepatocytes[J]. J Biol Chem, 2005, 280(48): 39942–39949.

[9] Zannis VI, Kateifides  AK, Fotakis P ,  (2012) Pleiotropic functions of HDL lead to protection from atherosclerosis and other diseases[J]. In Dyslipidemia- From Prevention to Treatment (Kelishadi,R., ed), pp. 173–196. Intech.

[10] Zannis VI, Fotakis  P, Koukos G , HDL biogenesis, remodeling, and catabolism[J]. Handb Exp Pharmacol, 2015, 224: 53–111

[11] GuX. KozarskyK, KriegerM. Scavenger receptor class B, type I-mediated [3H]cholesterol efflux to high and low density lipoproteins is dependent on lipoprotein binding to the receptor[J]. J Biol Chem, 2000, 275(39): 29993–30001.

[12] Nakamura K, Kennedy  MA, Baldán A , Expression and regulation of multiple murine ATP-binding cassette transporter G1 mRNAs/isoforms that stimulate cellular cholesterol efflux to high density lipoprotein[J]. J Biol Chem, 2004, 279(44): 45980–45989.

[13] Navab M, Hama  SY, Cooke CJ , Normal high density lipoprotein inhibits three steps in the formation of mildly oxidized low density lipoprotein: step 1[J]. J Lipid Res, 2000, 41(9): 1481–1494.

[14] Navab M, Hama  SY, Anantharamaiah GM , Normal high density lipoprotein inhibits three steps in the formation of mildly oxidized low density lipoprotein: steps 2 and 3[J]. J Lipid Res, 2000, 41(9): 1495–1508.

[15] Nofer JR, Levkau  B, Wolinska I , Suppression of endothelial cell apoptosis by high density lipoproteins (HDL) and HDL-associated lysosphingolipids[J]. J Biol Chem, 2001, 276(37): 34480–34485.

[16] Okura H, Yamashita  S, Ohama T , HDL/apolipoprotein A-I binds to macrophage-derived progranulin and suppresses its conversion into proinflammatory granulins[J]. J Atheroscler Thromb, 2010, 17(6): 568–577.

[17] De Nardo D, Labzin  LI, Kono H , High-density lipoprotein mediates anti-inflammatory reprogramming of macrophages via the transcriptional regulator ATF3[J]. Nat Immunol, 2014, 15(2): 152–160.

[18] Murphy AJ, Woollard  KJ, Hoang A , High-density lipoprotein reduces the human monocyte inflammatory response[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2008, 28(11): 2071–2077.

[19] Cockerill GW, Rye  KA, Gamble JR , High-density lipoproteins inhibit cytokine-induced expression of endothelial cell adhesion molecules[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 1995, 15(11): 1987–1994.

[20] Bursill CA, Castro  ML, Beattie DT , High-density lipoproteins suppress chemokines and chemokine receptors in vitro and in vivo[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2010, 30(9): 1773–1778.

[21] Doggen CJM, Smith  NL, Lemaitre RN , Serum lipid levels and the risk of venous thrombosis[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2004, 24(10): 1970–1975.

[22] Deguchi H, Pecheniuk  NM, Elias DJ , High-density lipoprotein deficiency and dyslipoproteinemia associated with venous  thrombosis in  men[J].  Circulation,  2005, 112(6): 893–899.

[23] Rütti S, Ehses  JA, Sibler RA , Low- and high-density lipoproteins modulate function, apoptosis, and proliferation of primary human and murine pancreatic beta-cells[J]. Endocrinology, 2009, 150(10): 4521–4530.

[24] Koseki M, Matsuyama  A, Nakatani K , Impaired insulin secretion in four Tangier disease patients with ABCA1 mutations[J]. J Atheroscler Thromb, 2009, 16(3): 292–296.

[25] Abderrahmani A, Niederhauser  G, Favre D , Human high-density lipoprotein particles prevent activation of the JNK pathway induced by human oxidised low-density lipoprotein particles in pancreatic beta cells[J]. Diabetologia, 2007, 50(6): 1304–1314.

[26] Seetharam D, Mineo  C, Gormley AK , High-density lipoprotein promotes endothelial cell migration and reendothelialization via scavenger receptor-B type I[J]. Circ Res, 2006, 98(1): 63–72.

[27] Mineo C, Yuhanna  IS, Quon MJ , High density lipoprotein-induced endothelial nitric-oxide synthase activation is mediated by Akt and MAP kinases[J]. J Biol Chem, 2003, 278(11): 9142–9149.

[28] Dole VS, Matuskova  J, Vasile E , Thrombocytopenia and platelet abnormalities in high-density lipoprotein receptor-deficient mice[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2008, 28(6): 1111–1116.

[29] Parker TS, Levine  DM, Chang JCC , Reconstituted high-density lipoprotein neutralizes gram-negative bacterial lipopolysaccharides in human whole blood[J]. Infect Immun, 1995, 63(1): 253–258.

[30] Vanhollebeke B, Pays  E. The trypanolytic factor of human serum: many ways to enter the parasite, a single way to kill[J]. Mol Microbiol, 2010, 76(4): 806–814.

[31] Singh IP, Chopra  AK, Coppenhaver DH , Lipoproteins account for part of the broad non-specific antiviral activity of human serum[J]. Antiviral Res, 1999, 42(3): 211–218.

[32] Gordon DJ, Probstfield  JL, Garrison RJ , High-density lipoprotein cholesterol and cardiovascular disease. Four prospective American studies[J]. Circulation, 1989, 79(1): 8–15.

[33] Nolte RT, Atkinson  D. Conformational analysis of apolipoprotein A-I and E-3 based on primary sequence and circular dichroism[J]. Biophys J, 1992, 63(5): 1221–1239.

[34] Segrest JP, Jackson  RL, Morrisett JD , A molecular theory of lipid-protein interactions in the plasma lipoproteins[J]. FEBS Lett, 1974, 38(3): 247–258.

[35] Borhani DW, Engler  JA, Brouillette CG . Crystallization of truncated human apolipoprotein A-I in a novel conformation[J]. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 1999, 55(Pt 9): 1578–1583.

[36] Borhani DW, Rogers  DP, Engler JA , Crystal structure of truncated human apolipoprotein A-I suggests a lipid-bound conformation[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1997, 94(23): 12291–12296.

[37] Segrest JP, Jones  MK, Klon AE , A detailed molecular belt model for apolipoprotein A-I in discoidal high density lipoprotein[J]. J Biol Chem, 1999, 274(45): 31755–31758.

[38] Wu  Z. Gogonea   V, Lee  X , The low resolution structure of ApoA1 in spherical high density lipoprotein revealed by small angle neutron scattering[J]. J Biol Chem, 2011, 286(14): 12495–12508

[39] Silva RA, Huang  R, Morris J , Structure of apolipoprotein A-I in spherical high density lipoproteins of different sizes[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 2008, 105(34): 12176–12181.

[40] Huang R, Silva  RA, Jerome WG , Apolipoprotein A-I structural organization in high-density lipoproteins isolated from human plasma[J]. Nat Struct Mol Biol, 2011, 18(4): 416–422.

[41] Langmann T, Klucken  J, Reil M , Molecular cloning of the human ATP-binding cassette transporter 1 (hABC1): evidence for sterol-dependent regulation in macrophages[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1999, 257(1): 29–33.

[42] Kielar D, Dietmaier  W, Langmann T , Rapid quantification of human ABCA1 mRNA in various cell types and tissues by real-time reverse transcription-PCR[J]. Clin Chem, 2001, 47(12): 2089–2097.

[43] Neufeld EB. Demosky   SJJr, Stonik  JA , The ABCA1 transporter functions on the basolateral surface of hepatocytes[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2002, 297(4): 974–979

[44] Neufeld EB, Remaley  AT, Demosky SJ , Cellular localization and trafficking of the human ABCA1 transporter[J]. J Biol Chem, 2001, 276(29): 27584–27590.

[45] Wang N, Silver  DL, Costet P , Specific binding of ApoA-I, enhanced cholesterol efflux, and altered plasma membrane morphology in cells expressing ABC1[J]. J Biol Chem, 2000, 275(42): 33053–33058.

[46] Remaley AT, Stonik  JA, Demosky SJ , Apolipoprotein specificity for lipid efflux by the human ABCAI transporter[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2001, 280(3): 818–823.

[47] Zannis VI, Chroni  A, Kypreos KE , Probing the pathways of chylomicron and HDL metabolism using adenovirus-mediated gene transfer[J]. Curr Opin Lipidol, 2004, 15(2): 151–166.

[48] Chroni A, Liu  T, Gorshkova I , The central helices of ApoA-I can promote ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1)-mediated lipid efflux. Amino acid residues 220-231 of the wild-type ApoA-I are required for lipid efflux in vitro and high density lipoprotein formation in vivo[J]. J Biol Chem, 2003, 278(9): 6719–6730.

[49] Chroni A, Liu  T, Fitzgerald ML , Cross-linking and lipid efflux properties of apoA-I mutants suggest direct association between apoA-I helices and ABCA1[J]. Biochemistry, 2004, 43(7): 2126–2139.

[50] Bodzioch M, Orsó  E, Klucken J , The gene encoding ATP-binding cassette transporter 1 is mutated in Tangier disease[J]. Nat Genet, 1999, 22(4): 347–351.

[51] Fitzgerald ML, Morris  AL, Rhee JS , Naturally occurring mutations in the largest extracellular loops of ABCA1 can disrupt its direct interaction with apolipoprotein A-I[J]. J Biol Chem, 2002, 277(36): 33178–33187.

[52] Fitzgerald ML, Mendez  AJ, Moore KJ , ATP-binding cassette transporter A1 contains an NH2-terminal signal anchor sequence that translocates the protein’s first hydrophilic domain to the exoplasmic space[J]. J Biol Chem, 2001, 276(18): 15137–15145.

[53] Brunham LR, Singaraja  RR, Hayden MR . Variations on a gene: rare and common variants in ABCA1 and their impact on HDL cholesterol levels and atherosclerosis[J]. Annu Rev Nutr, 2006, 26: 105–129.

[54] Orsó E, Broccardo  C, Kaminski WE , Transport of lipids from golgi to plasma membrane is defective in tangier disease patients and Abc1-deficient mice[J]. Nat Genet, 2000, 24(2): 192–196.

[55] Assmann G, von Eckardstein  A, Brewer HB . (2001) Familial analphalipoproteinemia: Tangier disease[J]. In The Metabolic and Molecular Basis of Inherited Disease (Scriver,C.R., Beaudet,A.L., Sly,W.S., & Valle,D., eds), pp. 2937–2960. McGraw-Hill, New York.

[56] Timmins JM, Lee  JY, Boudyguina E , Targeted inactivation of hepatic Abca1 causes profound hypoalphalipoproteinemia and kidney hypercatabolism of apoA-I[J]. J Clin Invest, 2005, 115(5): 1333–1342.

[57] Chroni A, Koukos  G, Duka A , The carboxy-terminal region of apoA-I is required for the ABCA1-dependent formation of alpha-HDL but not prebeta-HDL particles in vivo[J]. Biochemistry, 2007, 46(19): 5697–5708.

[58] Brunham LR, Kruit  JK, Iqbal J , Intestinal ABCA1 directly contributes to HDL biogenesis in vivo[J]. J Clin Invest, 2006, 116(4): 1052–1062.

[59] Reardon CA, Kan  HY, Cabana V , In vivo studies of HDL assembly and metabolism using adenovirus-mediated transfer of ApoA-I mutants in ApoA-I-deficient mice[J]. Biochemistry, 2001, 40(45): 13670–13680.

[60] Fotakis P, Tiniakou  I, Kateifides AK , Significance of the hydrophobic residues 225-230 of apoA-I for the biogenesis of HDL[J]. J Lipid Res, 2013, 54(12): 3293–3302

[61] Ohnsorg PM, Rohrer  L, Perisa D , Carboxyl terminus of apolipoprotein A-I (ApoA-I) is necessary for the transport of lipid-free ApoA-I but not prelipidated ApoA-I particles through aortic endothelial cells[J]. J Biol Chem, 2011, 286(10): 7744–7754.

[62] Biedzka-Sarek  M .  Metso  J ,  Kateifides  A , Apolipoprotein A-I exerts bactericidal activity against Yersinia enterocolitica serotype O:3[J]. J Biol Chem, 2011, 286(44): 38211–38219

[63] Fielding CJ, Shore  VG, Fielding PE . A protein cofactor of lecithin:cholesterol acyltransferase[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1972, 46(4): 1493–1498.

[64] Zannis VI, Chroni  A, Liu T ,  (2004) New insights on the roles of apolipoprotein A-I, the ABCA1 lipid transporter, and the HDL receptor SR-BI in the biogenesis and the functions of HDL[J]. (Simionescu,M., ed), pp. 33–72.

[65] Subbaiah PV, Albers  JJ, Chen CH , Low density lipoprotein-activated lysolecithin acylation by human plasma lecithin-cholesterol acyltransferase. Identity of lysolecithin acyltransferase and lecithin-cholesterol acyltransferase[J]. J Biol Chem, 1980, 255(19): 9275–9280.

[66] Jonas A. Lecithin cholesterol acyltransferase[J]. Biochim Biophys Acta, 2000, 1529(1-3): 245–256.

[67] Chroni A, Duka  A, Kan HY , Point mutations in apolipoprotein A-I mimic the phenotype observed in patients with classical lecithin:cholesterol acyltransferase deficiency[J]. Biochemistry, 2005, 44(43): 14353–14366.

[68] Santamarina-Fojo  S .  Hoeg  JM ,  Assmann  G , (2001) Lecithin cholesterol acyltransferase deficiency and fish eye disease[J]. In The Metabolic & Molecular Bases of Inherited Disease (Scriver,C.R., Beaudet,A.L., Sly,W.S., & Valle,D., eds), pp. 2817–2834. McGraw-Hill, New York.

[69] Fotakis P, Kuivenhoven  JA, Dafnis E , The Effect of Natural LCAT Mutations on the Biogenesis of HDL[J]. Biochemistry, 2015, 54(21): 3348–3359.

[70] Sorci-ThomasMG. ThomasMJ. The effects of altered apolipoprotein A-I structure on plasma HDL concentration[J]. Trends Cardiovasc Med, 2002, 12(3): 121–128.

[71] Koukos G, Chroni  A, Duka A , LCAT can rescue the abnormal phenotype produced by the natural ApoA-I mutations (Leu141Arg)Pisa and (Leu159Arg)FIN[J]. Biochemistry, 2007, 46(37): 10713–10721.

[72] Miettinen HE, Gylling  H, Miettinen TA , Apolipoprotein A-IFin. Dominantly inherited hypoalphalipoproteinemia due to a single base substitution in the apolipoprotein A-I gene[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 1997, 17(1): 83–90.

[73] Leren TP, Bakken  KS, Daum U , Heterozygosity for apolipoprotein A-I(R160L)Oslo is associated with low levels of high density lipoprotein cholesterol and HDL-subclass LpA-I/A-II but normal levels of HDL-subclass LpA-I[J]. J Lipid Res, 1997, 38(1): 121–131.

[74] Haase CL. Frikke-Schmidt   R, Nordestgaard  BG, Mutation in APOA1 predicts increased risk of ischaemic heart disease and total mortality without low HDL cholesterol levels[J]. J Intern Med, 2011, 270(2): 136–146

[75] Koukos G, Chroni  A, Duka A , Naturally occurring and bioengineered apoA-I mutations that inhibit the conversion of discoidal to spherical HDL: the abnormal HDL phenotypes can be corrected by treatment with LCAT[J]. Biochem J, 2007, 406(1): 167–174.

[76] Chroni A, Kan  HY, Shkodrani A , Deletions of helices 2 and 3 of human apoA-I are associated with severe dyslipidemia following adenovirus-mediated gene transfer in apoA-I-deficient mice[J]. Biochemistry, 2005, 44(10): 4108–4117.

[77] Chroni A, Kan  HY, Kypreos KE , Substitutions of glutamate 110 and 111 in the middle helix 4 of human apolipoprotein A-I (apoA-I) by alanine affect the structure and in vitro functions of apoA-I and induce severe hypertriglyceridemia in apoA-I-deficient mice[J]. Biochemistry, 2004, 43(32): 10442–10457.

[78] Kateifides AK, Gorshkova  IN, Duka A , Alteration of negatively charged residues in the 89 to 99 domain of apoA-I affects lipid homeostasis and maturation of HDL[J]. J Lipid Res, 2011, 52(7): 1363–1372.

[79] Gorshkova IN, Atkinson  D. Enhanced binding of apolipoprotein A-I variants associated with hypertriglyceridemia to triglyceride-rich particles[J]. Biochemistry, 2011, 50(12): 2040–2047.

[80] Zannis VI, Zanni  EE, Papapanagiotou A ,  (2006) ApoA-I functions and synthesis of HDL: Insights from mouse models of human HDL metabolism[J]. In High-Density Lipoproteins. From Basic Biology to Clinical Aspects pp. 237–265. Wiley-VCH, Weinheim.

[81] Gursky O. Crystal structure of D(185-243)ApoA-I suggests a mechanistic framework for the protein adaptation to the changing lipid load in good cholesterol: from flatland to sphereland via double belt, belt buckle, double hairpin and trefoil/tetrafoil[J]. J Mol Biol, 2013, 425(1): 1–16

[82] Mei X, Atkinson  D. Crystal structure of C-terminal truncated apolipoprotein A-I reveals the assembly of high density lipoprotein (HDL) by dimerization[J]. J Biol Chem, 2011, 286(44): 38570–38582.

[83] Chroni A, Nieland  TJ, Kypreos KE , SR-BI mediates cholesterol efflux via its interactions with lipid-bound ApoE. Structural mutations in SR-BI diminish cholesterol efflux[J]. Biochemistry, 2005, 44(39): 13132–13143.

[84] Duka A, Fotakis  P, Georgiadou D , ApoA-IV promotes the biogenesis of apoA-IV-containing HDL particles with the participation of ABCA1 and LCAT[J]. J Lipid Res, 2013, 54(1): 107–115.

[85] Sundaram M, Yao  Z. Intrahepatic role of exchangeable apolipoproteins in lipoprotein assembly and secretion[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2012, 32(5): 1073–1078.

[86] Kypreos KE, Zannis  VI. Pathway of biogenesis of apolipoprotein E-containing HDL in vivo with the participation of ABCA1 and LCAT[J]. Biochem J, 2007, 403(2): 359–367.

[87] Plump AS, Smith  JD, Hayek T , Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells[J]. Cell, 1992, 71(2): 343–353.

[88] Li  X. Kypreos   K, Zanni  EE , Domains of apoE required for binding to apoE receptor 2 and to phospholipids: implications for the functions of apoE in the brain[J]. Biochemistry, 2003, 42(35): 10406–10417

[89] Vowinkel T, Mori  M, Krieglstein CF , Apolipoprotein A-IV inhibits experimental colitis[J]. J Clin Invest, 2004, 114(2): 260–269.

[90] Ostos MA, Conconi  M, Vergnes L , Antioxidative and antiatherosclerotic effects of human apolipoprotein A-IV in apolipoprotein E-deficient mice[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2001, 21(6): 1023–1028.

[91] Duverger N, Tremp  G, Caillaud JM , Protection against atherogenesis in mice mediated by human apolipoprotein A-IV[J]. Science, 1996, 273(5277): 966–968.

[92] Cohen RD, Castellani  LW, Qiao JH , Reduced aortic lesions and elevated high density lipoprotein levels in transgenic mice overexpressing mouse apolipoprotein A-IV[J]. J Clin Invest, 1997, 99(8): 1906–1916.

[93] VerHagueMA. Cheng   D, Weinberg  RB , Apolipoprotein A-IV expression in mouse liver enhances triglyceride secretion and reduces hepatic lipid content by promoting very low density lipoprotein particle expansion[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2013, 33(11): 2501–2508

[94] Weinberg RB, Gallagher  JW, Fabritius MA , ApoA-IV modulates the secretory trafficking of apoB and the size of triglyceride-rich lipoproteins[J]. J Lipid Res, 2012, 53(4): 736–743.

[95] Amar MJ, Shamburek  RD, Vaisman B , Adenoviral expression of human lecithin-cholesterol acyltransferase in nonhuman primates leads to an antiatherogenic lipoprotein phenotype by increasing high-density lipoprotein and lowering low-density  lipoprotein[J].  Metabolism, 2009, 58(4): 568–575.

Acknowledgements:

This work was supported by National Institute of Health Grant HL-48739 and HL-68216.

RIGHTS & PERMISSIONS

2017 2017 by the Journal of Biomedical Research.